如何選擇最佳的全血DNA、RNA提取方法？
編輯：百泰克 上傳時間：2018-03-05 瀏覽次數(shù)：12268
從全血中提取DNA和RNA應(yīng)該說是最基本的工作了，提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的實(shí)驗(yàn)和分析，可供選擇的方法非常多，亂花漸欲迷人眼，如何選擇最適合的方法，成了很多人實(shí)驗(yàn)開始前最難以抉擇的事情。我們從兩個方面，層層剝繭，分析最佳的實(shí)驗(yàn)方法。
1、 全血的采集保存和DNA的提取
I.用含抗凝劑的采血管進(jìn)行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不會影響下游的反應(yīng)，如果沒有采血管，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提前準(zhǔn)備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，顛倒混勻即可。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年內(nèi)均可以提取，保存時間越短，提取的質(zhì)量越高，最好在2個月內(nèi)提取。
II.DNA提取方法的選擇：全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種（比如Qiagen、Promega、Bioteke；摒棄酚氯仿手提的方法，時間長毒性大），原理及步驟基本相同。雖然各公司推出了N多型號，讓人不知如何去選擇，但從原理和操作步驟看，基本就是離心柱和溶液型兩種。一般來說，離心柱（DP1801）的提取純度高一些，但是處理量小（0.1-1ml）、得率略低；溶液型(DP2101或DP2201)的提取量大（1-10ml）得率也高于離心柱。醫(yī)院的血液標(biāo)本一般在2ml以上，一般選擇溶液型的方法提取.在說到國產(chǎn)和進(jìn)口差別的時候，很多人以為進(jìn)口一定比國產(chǎn)的好，我們覺得沒有最好，只有更好！在不斷的進(jìn)行試驗(yàn)優(yōu)化之后，全血基因組DNA提取試劑盒DP2101或DP2201開創(chuàng)了第三代技術(shù)，不需要蛋白酶K消化，進(jìn)口的都是要借助蛋白酶K的啊！DP2101或DP2201減少了蛋白酶K現(xiàn)配現(xiàn)用的麻煩和消化的時間，而且提取量和穩(wěn)定性更好。
III.非抗凝血（凝固血）能否提取？答案是肯定的，而且一點(diǎn)都不麻煩，提取效果和抗凝血沒有差別！在你找遍了進(jìn)口的所有品牌都找不到后，回過頭來您才發(fā)現(xiàn)原來他就在身邊，百泰克的凝固血基因組DNA提取試劑盒已經(jīng)有很多忠實(shí)的用戶。
2、 全血RNA如何提取
I.全血RNA提取過程哪些是RNA降解的因素？
全血中RNA酶是非常豐富的，RNA在沒有保護(hù)的狀態(tài)下很容易降解！哪些是狀態(tài)RNA不受保護(hù)呢，比如紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞的過程，紅細(xì)胞裂解液是低濃度的平衡鹽溶液，沒有抑制RNase的成份，這時候RNA不受保護(hù)；DNA酶消化的時候RNA也不受保護(hù)，這個時候也沒有抑制RNase的成份。
II.什么樣的提取方法更好？
我們在選擇方法的時候要傾向于對RNA全程有保護(hù)的方法！一般的方法都是先用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，然后從白細(xì)胞提取核酸，還要經(jīng)過DNA酶的消化去除DNA，這種并不是最好的方法，過程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是最好的方法，將采集的血液迅速加入3倍體積的裂解液RLS——RP4001血液(液體樣本)總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)的裂解液，迅速顛倒混勻。裂解液RLS含有強(qiáng)烈的蛋白變性劑，能迅速變性蛋白，是RNase變性，不能對RNA降解。裂解后的混合液還可以用來運(yùn)輸，以避免RNA降解，這個方法成為博奧生物制作表達(dá)譜芯片RNA運(yùn)輸和提取的推薦方法http://www.ebiotrade.com/newsf/2009-5/2009515134112578.html
